(Flow cytometry, FCM) zelula-markatzaile orbantuen fluoreszentzia-intentsitatea neurtzen duen zelula-analizzatzaile bat da. Zelula bakarren analisian eta sailkapenean oinarritutako goi-teknologiako teknologia da. Azkar neurtu eta sailka ditzake zelulen tamaina, barne egitura, DNA, RNA, proteinak, antigenoak eta beste propietate fisiko edo kimikoak, eta sailkapen horien bilduman oinarritu daiteke.
Fluxu-zitometroak bost zati hauek ditu nagusiki:
1 Fluxu-ganbera eta sistema fluidikoa
2 Laser argi iturria eta habea moldatzeko sistema
3 Sistema optikoa
4 Elektronika, biltegiratze, bistaratzeko eta aztertzeko sistema
5 Zelula sailkatzeko sistema
Horien artean, laser argi-iturburuan eta izpiak eratzeko sisteman laser kitzikapena da fluxu-zitometrian fluoreszentzia-seinaleen neurketa nagusia. Kitzikapen-argiaren intentsitatea eta esposizio-denbora fluoreszentzia-seinalearen intentsitatearekin erlazionatuta daude. Laser argi-iturri koherentea da, uhin-luzera bakarreko, intentsitate handiko eta egonkortasun handiko argiztapena eskain dezakeena. Baldintza hauek betetzeko kitzikapen argi-iturri aproposa da.
Laser iturriaren eta fluxu-ganberaren artean bi lente zilindriko daude. Lente hauek laser-iturritik igorritako sekzio zirkularra duen laser izpi bat sekzio txikiagoa duen izpi eliptiko batera bideratzen du (22 μm × 66 μm). Izpi eliptiko honen barruan dagoen laser energia banaketa normal baten arabera banatzen da, laser detektatzeko eremutik igarotzen diren zelulen argiztapen-intentsitate koherentea bermatuz. Bestalde, sistema optikoa lente, zulo eta iragazki multzo anitzek osatzen dute, gutxi gorabehera bi taldetan bana daitezkeenak: fluxu-ganberaren urpean eta urpean.
Fluxu-ganberaren aurrean dagoen sistema optikoa lente batez eta zuloz osatuta dago. Lentearen eta zuloaren funtzio nagusia (normalean bi lente eta zulo bat) laser izpiak laser iturriak igortzen duen ebakidura zirkularra bideratzea da, sekzio txikiagoa duen izpi eliptiko batean. Honek laser-energia banaketa normal baten arabera banatzen du, zelulen argiztapen-intentsitate koherentea bermatuz laser detektatzeko eremuan zehar eta argi galduaren interferentziak minimizatuz.
Hiru iragazki mota nagusi daude:
1: Pasabide luzeko iragazkia (LPF) - balio zehatz bat baino uhin-luzera handiagoak dituen argia bakarrik igarotzen uzten du.
2: Pasa laburreko iragazkia (SPF) - balio zehatz batetik beherako uhin-luzera duten argiak soilik igarotzen uzten du.
3: Bandpass iragazkia (BPF) - uhin-luzera-tarte jakin bateko argia soilik igarotzen uzten du.
Iragazkien konbinazio ezberdinek fluoreszentzia-seinaleak uhin-luzera desberdinetan zuzen ditzakete hodi fotobiderkatzaile indibidualetara (PMT). Adibidez, PMTren aurrean fluoreszentzia berdea detektatzeko iragazkiak (FITC) LPF550 eta BPF525 dira. PMTren aurrean fluoreszentzia laranja-gorria (PE) detektatzeko erabiltzen diren iragazkiak LPF600 eta BPF575 dira. PMTren aurrean fluoreszentzia gorria detektatzeko iragazkiak (CY5) LPF650 eta BPF675 dira.
Fluxu-zitometria zelulak sailkatzeko erabiltzen da batez ere. Informatika teknologiaren aurrerapenarekin, immunologiaren garapenarekin eta antigorputz monoklonalaren teknologia asmatzearekin batera, biologian, medikuntzan, farmazian eta beste alorretan dituen aplikazioak gero eta hedatuago daude. Aplikazio horien artean daude zelulen dinamikaren analisia, zelulen apoptosia, zelulen tipifikazioa, tumoreen diagnostikoa, sendagaien eraginkortasunaren analisia, etab.
Argitalpenaren ordua: 2023-09-21
