(Fluxu-zitometria, FCM) zelula-analizatzaile bat da, zelula-markatzaile tindatuen fluoreszentzia-intentsitatea neurtzen duena. Zelula bakarren analisi eta sailkapenean oinarrituta garatutako goi-mailako teknologia da. Zelulen tamaina, barne-egitura, DNA, RNA, proteinak, antigenoak eta beste propietate fisiko edo kimiko batzuk azkar neurtu eta sailka ditzake, eta sailkapen horien bilduman oinarritu daiteke.
Fluxu-zitometroak bost atal hauek ditu batez ere:
1 Fluxu-ganbera eta fluidoen sistema
2 Laser argi iturria eta izpi moldatzeko sistema
3 Sistema optikoa
4 Elektronika, biltegiratze, bistaratze eta analisi sistema
5 Zelulen sailkapen sistema
Horien artean, laser argi-iturrian eta habe-formazio sisteman laser kitzikapena da fluoreszentzia-seinaleen neurketa nagusia fluxu-zitometrian. Kitzikapen-argiaren intentsitatea eta esposizio-denbora fluoreszentzia-seinalearen intentsitatearekin erlazionatuta daude. Laserra uhin-luzera bakarreko, intentsitate handiko eta egonkortasun handiko argiztapena eman dezakeen argi-iturri koherentea da. Eskakizun horiek betetzeko kitzikapen-argi-iturri aproposa da.
Bi lente zilindriko daude laser iturriaren eta fluxu-ganberaren artean. Lente hauek laser iturritik igortzen den zeharkako sekzio zirkularra duen laser izpi bat fokatzen dute zeharkako sekzio txikiagoa duen (22 μm × 66 μm) izpi eliptiko batera. Izpi eliptiko honen barruko laser energia banaketa normal baten arabera banatzen da, laser detekzio eremutik igarotzen diren zelulen argiztapen intentsitate koherentea bermatuz. Bestalde, sistema optikoa lente, zulotxo eta iragazki multzo anitzez osatuta dago, eta bi taldetan bana daitezke gutxi gorabehera: fluxu-ganberaren gora eta behera.
Fluxu-ganberaren aurreko sistema optikoa lente batez eta zulotxo batez osatuta dago. Lentearen eta zulotxoaren funtzio nagusia (normalean bi lente eta zulotxo bat) laser iturriak igorritako zeharkako sekzio zirkularreko laser izpia zeharkako sekzio txikiagoa duen izpi eliptiko batean fokatzea da. Horrek laser energia banaketa normal baten arabera banatzen du, laser detekzio eremuko zelulen argiztapen intentsitate koherentea bermatuz eta argi galduaren interferentziak minimizatuz.
Hiru iragazki mota nagusi daude:
1: Iragazki luzea (LPF) - balio jakin bat baino uhin-luzera handiagoa duten argiak bakarrik igarotzen uzten ditu.
2: Iragazki laburreko iragazkia (SPF) - balio jakin baten azpitik dauden uhin-luzera duten argia bakarrik igarotzen uzten du.
3: Banda-iragazkia (BPF) - uhin-luzera tarte jakin bateko argia bakarrik igarotzen uzten du.
Iragazkien konbinazio ezberdinek uhin-luzera desberdinetako fluoreszentzia-seinaleak fotobiderkatzaile-hodi (PMT) indibidualetara bideratu ditzakete. Adibidez, PMTren aurrean fluoreszentzia berdea (FITC) detektatzeko iragazkiak LPF550 eta BPF525 dira. PMTren aurrean fluoreszentzia laranja-gorria (PE) detektatzeko erabiltzen diren iragazkiak LPF600 eta BPF575 dira. PMTren aurrean fluoreszentzia gorria (CY5) detektatzeko iragazkiak LPF650 eta BPF675 dira.
Fluxu-zitometria batez ere zelulak sailkatzeko erabiltzen da. Ordenagailu-teknologiaren aurrerapenarekin, immunologiaren garapenarekin eta antigorputz monoklonalen teknologiaren asmakuntzarekin, gero eta aplikazio gehiago ditu biologian, medikuntzan, farmazian eta beste arlo batzuetan. Aplikazio horien artean daude zelulen dinamikaren analisia, zelulen apoptosia, zelulen tipifikazioa, tumoreen diagnostikoa, sendagaien eraginkortasunaren analisia, etab.
Argitaratze data: 2023ko irailaren 21a
